Leonardo, Raphael, Donatello dan Michaelangelo dapat digunakan pemain untuk menyelesaikan game ini. Masing-masing karakter mempunyai gerakan, senjata dan teknik bertarung yang berbeda. Seperti Michaelangelo dengan kepiawaian menggunakan nunchuck-nya yang cepat dan lemparan Sai-nya Raphael yang bertenaga. Karakter melompat dari atap ke atap, gedung-gedung tinggi dan berlari di lorong selokan di seluruh kota demi mengalahkan musuh mereka. Bila kura-kura bersatu, mereka bisa mencapai lokasi yang tidak bisa dicapai saat dimainkan sendiri atau mengalahkan musuh. Semua karakter dari komik dan filmnya, termasuk Purple Dragon Street Gang dan Foot Clan yang terkenal muncul di game ini.